過氧化物酶(POD)測試盒_分光光度法
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
測定原理：
POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
過氧化物酶(POD)測試盒_分光光度法
試劑的組成：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體100μL×1支，4℃保存；
試劑三：液體100μL×1支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟和加樣表：
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三按照2.6（mL）：1.5（μL）：1（μL）的比例混勻；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）預(yù)熱10min以上；現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、在1mL玻璃比色皿中加入50μL樣本和950μL工作液，混勻，記錄470nm下1min時吸光值A(chǔ)1和2min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A2-A1。
注意：
如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA大于0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公
式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
